Mobilna faza je enakovredna tekoči fazi krvi, med uporabo pa morate biti pozorni na različne stvari. Med njimi je nekaj "pasti", na katere je treba biti pozoren.
01. Izmerite pH mobilne faze po dodajanju organskega topila
Če merite pH z organskim dodatkom, bo pH, ki ga dobite, drugačen kot pred dodajanjem organskega topila. Najpomembneje pa je biti dosleden. Če vedno merite pH po dodajanju organskega topila, ne pozabite navesti svojih korakov v metodi, ki jo uporabljate, da bodo drugi sledili isti metodi. Ta metoda ni 100-odstotno natančna, vendar bo vsaj ohranila doslednost metode. To je lahko pomembnejše od pridobivanja natančne vrednosti pH.
02. Medpomnilnik ni uporabljen
Namen pufra je nadzorovati pH in preprečiti njegovo spreminjanje. Številne druge metode spremenijo pH mobilne faze, kar lahko povzroči premike v retenzijskem času, obliki vrha in odzivu vrha.
Mravljinčna kislina, TFA itd. niso pufri
03. Neuporaba pufra v normalnem območju pH
Vsak pufer ima širino razpona 2 pH enot, znotraj katere zagotavlja najboljšo pH stabilnost. Pufri zunaj tega okna ne bodo zagotovili učinkovite odpornosti na spremembe pH. Uporabite pufer v pravilnem območju ali pa izberite pufer, ki pokriva pH, ki ga potrebujete.
04. Organski raztopini dodajte pufer
Mešanje puferske raztopine z organsko fazo bo najverjetneje povzročilo obarjanje pufra. V mnogih primerih, tudi če je prišlo do padavin, jih je še vedno težko zaznati. Ne pozabite, da vodni fazi vedno dodate organsko raztopino, kar lahko močno zmanjša možnost puferske precipitacije.
05. Zmešajte koncentracijski gradient od 0 % s črpalko
Črpalke, ki so danes na voljo, lahko učinkovito mešajo mobilne faze in sproti odplinjujejo, vendar ne bodo vsi, ki uporabljajo vašo metodo, imeli visokokakovostne črpalke. Zmešajte A in B v eno raztopino in jo zaženite 100 % v liniji.
Na primer, 950 ml organske začetne mešanice lahko pripravimo z mešanjem s 50 ml vode. Prednost tega je, da lahko zmanjša variabilnost med HPLC in zmanjša možnost mehurčkov in padavin v sistemu. Omeniti velja, da je razmerje mešanice črpalke 95:5, kar pa ne pomeni, da je tudi retencijski čas predmešane mešanice v steklenici 95:5.
06. Neuporaba pravilne modificirane kisline (baze) za zamenjavo pufra
Uporabljajte samo kislino ali bazo, ki tvori pufersko sol, ki jo uporabljate. Na primer, natrijev fosfatni pufer je treba pripraviti samo s fosforno kislino ali natrijevim hidroksidom.
07. Nenavajanje vseh informacij o pufru v metodi, kot je dodajanje 5 gnatrijev fosfat na 1000 ml vode.
Vrsta pufra določa območje pH, ki ga je mogoče pufrati. Zahtevana koncentracija določa moč pufra. 5 gramov ali brezvodnega natrijevega fosfata in 5 gramov mononatrijevega fosfata monohidrata imata različne jakosti pufra.
08. Dodajanje organskih topil pred preverjanjem
Če je prejšnja metoda uporabljala pufrsko raztopino za izhodišče B, vaša metoda pa uporablja organsko raztopino za izhodišče B, lahko upamo, da se pufer usede v cevje črpalke in glavo črpalke.
09. Dvignite steklenico in izpraznite zadnjo kapljico
Obstaja velika verjetnost, da ne boste imeli dovolj mobilne faze za dokončanje celotne serije in se bo vaš vzorec kadil. Poleg možnosti izgorevanja sistema črpalke in kolone bo mobilna faza popolnoma izhlapela in mobilna faza na vrhu steklenice se bo spremenila.
10. Uporabite ultrazvočno razplinjevanje mobilne faze
Najpomembnejše je zagotoviti, da so vse puferske soli raztopljene, vendar je to najslabši način za razplinjevanje in bo hitro segrel mobilno fazo, kar bo povzročilo izhlapevanje organskih komponent. Če želite pozneje prihraniti nepotrebne težave, si vzemite pet minut za vakuumsko filtriranje mobilne faze.
Čas objave: 27. avgusta 2024